蛋白質(zhì)及其功能的研究對(duì)于理解生物學(xué)**關(guān)重要，但從復(fù)雜混合物中分離和純化單一蛋白質(zhì)是一項(xiàng)艱苦的工作。投入時(shí)間后，使用各種色譜法純化目標(biāo)蛋白質(zhì) 方法，由于儲(chǔ)存不當(dāng)而失去蛋白質(zhì)完整性將是毀滅性的。如果您需要將蛋白質(zhì)用于多個(gè)下游研究，良好的儲(chǔ)存條件尤為重要。您可能需要長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存??您的制劑，并且一些實(shí)驗(yàn)要求蛋白質(zhì)保持其原始結(jié)構(gòu)，結(jié)合親和力或酶活性。**佳的儲(chǔ)存條件是每種蛋白質(zhì)和情況都不同的; 盡管如此，有可能提出一些蛋白質(zhì)儲(chǔ)存和穩(wěn)定性的一般指導(dǎo)原則。以下是一些快速簡(jiǎn)單的建議，涉及濃度，添加劑，樣品大小和儲(chǔ)存溫度，以便在儲(chǔ)存蛋白質(zhì)以備將來使用時(shí)考慮。
濃度在保持蛋白質(zhì)在溶液中穩(wěn)定方面起著關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)需要以高濃度儲(chǔ)存 - **少1 mg / ml。稀釋蛋白質(zhì)溶液（<1 mg / ml）由于與儲(chǔ)存管的低水平結(jié)合而更容易失活和損失。因?yàn)樵谀承┣闆r下濃度較高可能不太現(xiàn)實(shí)，所以通常的做法是將“載體”或“填充物”蛋白質(zhì)（如純化的牛血清白蛋白（BSA））加入1**5 mg / ml（0.1％）**0.5％），稀釋蛋白質(zhì)溶液并防止這種降解和損失。
可以將許多化合物添加到蛋白質(zhì)溶液中以延長(zhǎng)保質(zhì)期。您添加到蛋白質(zhì)溶液中的含量取決于預(yù)期用途和純化蛋白質(zhì)的特性。例如，如果您純化了用于蛋白質(zhì)印跡或免疫沉淀實(shí)驗(yàn)等分析的抗體蛋白，您可以添加冷凍保護(hù)劑（如甘油或乙二醇）**終濃度為25％**50％，以幫助穩(wěn)定蛋白質(zhì)。這些添加劑有助于防止溶液在冷凍（-20°C）時(shí)凝固，防止形成破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的冰晶。聚乙二醇（PEG）和聚山梨醇酯（如吐溫80）等聚合物也可以幫助保持冰晶，但濃度低得多（0.01％）。因?yàn)槟愕牡鞍踪|(zhì)制劑不會(huì)結(jié)冰，它可以多次使用而無需解凍。此外，在此濃度下，吐溫80還可以幫助防止蛋白質(zhì)與儲(chǔ)存管結(jié)合。但是，冷凍保護(hù)劑雜質(zhì)可能會(huì)影響蛋白質(zhì)活性，因此您可能需要通過與供應(yīng)商核實(shí)來采取措施確保所選試劑的質(zhì)量。另一個(gè)考慮因素是盡管這些添加劑有利于抗體使用，但高粘度會(huì)影響某些下游程序中的蛋白質(zhì)使用，例如額外的色譜步驟，蛋白質(zhì)結(jié)合/相互作用測(cè)定或質(zhì)譜分析，因此應(yīng)考慮其他應(yīng)用。因此，您可能需要通過與供應(yīng)商核實(shí)，采取措施確保所選試劑的質(zhì)量。另一個(gè)考慮因素是盡管這些添加劑有利于抗體使用，但高粘度會(huì)影響某些下游程序中的蛋白質(zhì)使用，例如額外的色譜步驟，蛋白質(zhì)結(jié)合/相互作用測(cè)定或質(zhì)譜分析，因此應(yīng)考慮其他應(yīng)用。因此，您可能需要通過與供應(yīng)商核實(shí)，采取措施確保所選試劑的質(zhì)量。另一個(gè)考慮因素是盡管這些添加劑有利于抗體使用，但高粘度會(huì)影響某些下游程序中的蛋白質(zhì)使用，例如額外的色譜步驟，蛋白質(zhì)結(jié)合/相互作用測(cè)定或質(zhì)譜分析，因此應(yīng)考慮其他應(yīng)用。
可以添加蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)的蛋白水解切割，從而保持蛋白質(zhì)完整。**終濃度為0.02％**0.05％（w / v）的抗菌劑如疊氮化鈉（NaN3）或終濃度為0.01％（w / v）的硫柳汞抑制微生物生長(zhǎng)。金屬螯合劑如EDTA的終濃度為1**5mM，避免了金屬誘導(dǎo)的巰基（-SH）基團(tuán)的氧化，并有助于將蛋白質(zhì)維持在還原狀態(tài)。**終濃度為1**5mM的還原劑如二硫蘇糖醇（DTT）或2-巰基乙醇（2-ME）也有助于通過防止半胱氨酸的氧化將蛋白質(zhì)維持在還原狀態(tài)。在將添加劑與蛋白質(zhì)混合時(shí)，請(qǐng)記住，蛋白質(zhì)溶液不應(yīng)通過渦旋劇烈搖動(dòng)。
如您所見，有許多添加劑選擇。Bio-Rad等供應(yīng)商提供方便尺寸的試劑，并提供使用添加劑的方案和提示。請(qǐng)務(wù)必閱讀并規(guī)劃下游實(shí)驗(yàn)，以確保正確的儲(chǔ)存條件。
如果您確定使用甘油或乙二醇對(duì)您的應(yīng)用不利，并且因?yàn)閮鋈谘h(huán)會(huì)降低蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，您應(yīng)該分配并準(zhǔn)備一次性等分試樣，這樣一旦解凍，蛋白質(zhì)溶液就不必是再冷凍。這些小等分試樣可以使用一次。訣竅是提前計(jì)劃并避免多次凍融循環(huán)。
通常，蛋白質(zhì)**好在≤4°C的溫度下儲(chǔ)存在干凈，無菌的玻璃容器或聚丙烯管中。在室溫下儲(chǔ)存經(jīng)常導(dǎo)致蛋白質(zhì)降解和/或不活動(dòng)。對(duì)于短期儲(chǔ)存****幾周，許多蛋白質(zhì)可以儲(chǔ)存在含有蛋白酶抑制劑的簡(jiǎn)單緩沖液中，溫度為4°C。對(duì)于中期儲(chǔ)存，一個(gè)月到一年，在-20°C或-80°C冷凍是更常見的冷蛋白儲(chǔ)存形式。對(duì)于長(zhǎng)達(dá)一年的嚴(yán)重長(zhǎng)期儲(chǔ)存，一些研究人員選擇在液氮中將一次性蛋白質(zhì)等分試樣用于在液氮下儲(chǔ)存在干凈的塑料容器中。該方法包括將蛋白質(zhì)溶液逐滴（約100μl/滴）加入液氮池中，然后收集液滴大小的冷凍珠并在液氮下將它們儲(chǔ)存在冷凍瓶中。根據(jù)您的情況和蛋白質(zhì)的特性，您可能會(huì)偏好一個(gè)存儲(chǔ)溫度和存儲(chǔ)持續(xù)時(shí)間。請(qǐng)務(wù)必牢記預(yù)期的應(yīng)用程序。
